果树苗木无毒苗的培育

2025-10-15 14:58:50

果树苗木无毒苗的培育果树苗木病毒病多由嫁接传染，一旦病毒侵入树体后，在自然条件下永远保存在树体中，无法消除。根据果树苗木病毒病及其类病毒病害的侵染、传播和发病特点，国内外总的防治策略是使用无病毒或抗病毒繁殖材料，严格植物检疫，清除和限制侵染源，防治和控制传毒虫媒。果树苗木嫁接繁殖时，如果母本树带有病毒，就必然把病毒传染给新繁殖的苗木。目前，在栽培的果树苗木中，有些品种已全部受病毒侵染，患有病毒病。为了避免病毒病的危害，就必须清除病树中的病毒，使之无病毒化，这是果树苗木病毒病防治对策的第一步。

获得无病毒母本树的方法主要有3种。第一种方法是从果园中选择品种纯正、多年间树势健壮、品质产量都好的单株，经病毒检验，确认无病毒后即可获得母本树；第二种方法是人工培育无病毒母本树，包括通常采用热处理与茎尖培养相结合和茎尖生长点培养2种方法；第三种方法是引进国外无病毒品种。

果树苗木热处理脱毒，是生产上应用最早、最广泛的一种脱毒手段。在果树苗木生产上，这种技术已经很成熟，已培育出许多无病毒果树苗木单株。而茎尖组织培养需要精细的技术，与热处理相比，难度大得多。但是对于用热处理不能或难于清除的病毒，用茎尖培养或热处理同组织培养相结合的方法，则可以获得无病毒的个体。此外，最近开发出的微体嫁接技术，已应用于获得无病毒个体并引起了人们的广泛关注，其主要原理是在无菌条件下培养的砧木实生苗上，嫁接茎尖分生组织，进而获得无病毒苗。

一、热处理脱毒

早在100多年前，苏格兰的园艺工作者就开始利用热力治疗植物病害。1923年，采用温汤处理而脱去甘蔗的一种病毒，成为了在病毒病害中最早脱毒成功的例子。在果树苗木方面，于1936〜1941年间，对桃丛生病、桃黄化病、伪桃病等，先后用热处理，主要是温汤浸渍法获得脱毒成功。其中对桃丛生病毒，不仅用温汤而且用高温空气处理也获得成功。同时设计出一种处理装置，探索出了热空气处理法。即把空气温度调节在30~40^0之间，处理一定时间，以达到脱毒的目的。自1950年对马铃薯卷叶病毒用热处理脱毒取得成功以来，到目前为止，除黄化型病毒以外，其他多种病毒的脱毒也相继取得成功。常绿果树苗木病毒病用热处理法脱毒并取得成功的实例主要有柑橘速衰病毒、柑橘裂皮类病毒、柑橘脉突病毒、柑橘碎叶病毒等。

热处理方法有2种，一是温汤浸渍和高温蒸汽处理，另一是高温空气处理。

(一）温汤浸溃和高温蒸汽处理

通常应用的有50〜551处理10~501!^、5^：处理1〜5}1或35cC处理30〜40h等多种温时组合。特别是热不稳定的病毒类，有些病例在40〜45^：处理5〜301丨11或30^：处理34即可脱毒。即树体的一部分。由于温汤处理对植物体的损害较大，有时会导致植物组织窒息或是呈水渍状，所以在对果树进行热处理时，通常只处理接穗；而高温蒸汽处理，则对-42-植物组织损害较少，因此，现在多用高温蒸汽处理。在进行热处理时，最重要的是要严格控制温度和处理时间。

(二）高温空气处理

处理的植物体，通常多用盆栽被病毒侵染的整株苗木，因为热处理所用的病株，其染病组织越小脱毒效果越高。但刚移栽的苗木根系耐热性差，一般用移栽后3个月，最好用盆栽1年左右的苗木进行处理。泥制花盆具有良好的耐热性，热处理中根部温度将比热处理温度下降数度，因此推荐用泥制花盆。所以柑橘、苹果的热处理，用无病毒的实生砧芽接带毒的病穗，芽接1周后开始进行热处理，脱毒效果良好。目前，热处理装置有多种，小的只有11^，大的人可以进入内部操作，可供大量试材热处理用。为调节湿度，还应安装加湿器。尽管高温空气处理不像温汤处理那样，要求病毒钝化温度与植物体能忍受温度之间相吻合，但温度及有关条件也必须力求精密。

热处理温度因病毒种类而异。有的病毒在33〜34尤条件下即可脱毒，另一些病毒必须在39〜42的条件下，才能脱毒。生产实践中，一般多用35〜381恒温，尤以381恒温的实例较多。如苹果在37尤土1尤恒温下热处理28〜30d,对褪绿叶斑病毒、茎痘病毒和茎沟病毒的平均脱毒率为26.5%。

许多病例证明，变温热处理较恒温热处理的脱毒效果好。近年来，为了减少高温对植物体的损伤，有些病例改为白天用40〜45^：处理12〜16h,夜间30〜35^：处理8~12ho

生产实践中以白天如^处理^匕，夜间30(^处理8匕的实例居多。但也不能一概而论。如柑橘速衰病毒幼苗黄化株系，在381恒温条件下处理8周不能脱毒，必须处理12周才能脱毒；反之，在白天40，夜间30(^的变温条件下，处理8周即能脱毒。柑橘碎叶病毒，38^处理16周不能脱毒，但白天401、夜间301处理6周和白天441、夜间301处理2周却脱毒成功。

在进行热处理脱毒时，还应控制好相对湿度和光照。通常相对湿度应保持在70^〜80*之间。在过分干燥的条件下，热处理的新梢生长不良。光以自然光最好，但秋冬期间，适当补充人工光照，对新梢伸长有良好作用。而有的病例用荧光灯和白色灯照明161即可脱毒。

为了提高植物的耐热性，延长植物在热处理中的生存时间，热处理前往往要进行预处理。例如，在用38^：热处理前，先在27〜351下处理1〜2周。在植物耐热性允许的范围内，热处理的温度越高脱毒效果越好，因此，前处理的温度也以逐渐由低到高为好。

植物体的耐热性与植物体各部分组织中的碳水化合物的含量成正相关，因此，应在植物组织成熟的季节进行热处理。

用热处理脱毒法培育无病毒个体时，通常是剪取苗木在热处理中伸长出的新梢顶端嫩枝，将其嫁接到无病毒实生砧木上。若是用新梢停止生长的苗进行热处理时，可剪取已硬化的枝条，直接嫁接到砧木上。对于葡萄，剪取热处理中伸长新梢或副梢的顶端部分，长约1〜5。1，扦插在珍珠岩等适宜的保湿扦插床中，不久即发根，一个月后即可移植。如果用此法不能获得无病毒个体时，就必须剪取新梢顶端更短的部分。

二、茎尖培养脱毒

(―)概述

病毒侵入植物体后，一般具有系统侵染性，也即具有全身扩展的特性，但不同的组织和部位，病毒的分布和浓度有很大差异，甚至有的组织或部位尚无病毒。植物感染病毒后不含有病毒的部位，对病毒的防治具有重要的意义。例如，大多数植物的种子不带病毒，因此可以自然获得无病毒后代。除种子之外生长点附近，即茎尖和根尖的分生组织也多不含有病毒。但不含有病毒的部分是极小的，不超过0.1〜

0.5mn^这样小的无病毒组织，以往无法繁殖利用。自组织培养技术发展以来，可以切取这种微小的无病毒组织，用组织培养技术也可培养成完整的植株。如1934年White用感染烟草花叶病毒的番茄根和1949年Limasset等用感染烟草花叶病毒的烟草茎分别进行的研究结果表明，病毒浓度呈梯度变化，病毒粒子随着植物组织的成熟而增加，顶端组织不带病毒。Morel等于1952年从感染花叶病毒和斑萎病毒的植株上，切取茎尖组织进行培养，成功地获得无病毒的大丽花。目前，茎尖培养在草本植物上应用较多，而在木本植物上应用甚少。这项技术在番木瓜、草莓、柑橘和葡萄的脱毒方面，已获成功并取得初步应用效果。

茎尖培养脱毒程序，一般有以下6个步骤：第一步，材料处理和接种；第二步，诱导芽分化和小植株的增殖；第三步，诱导生根；第四步，生根植株的移栽；第五步，移入苗:第六步，病毒检测。其中分化、增殖、生根3个步骤，

均需要特殊的培养基。在果树苗木茎尖培养中最常使用的是河-

培养基，但各步骤中所需要的植物生长调节剂种类、用量及配合比例各不相同，并依培养的果树苗木种类而异。脱毒成功机率与茎尖大小直接相关。对不同的植物，采用大小相同的茎尖进行培养，脱毒效果主要取决于病毒类型而不是植物种类。正常茎尖培养时切取的茎尖越小，脱毒率就越高。草莓切取茎尖为0.2〜0.311^时，脱毒率为100*;切取茎尖为1.011^时，脱毒率仅为50*。但茎尖过小培养成活率低，而且操作难度也大。因此，脱毒时要兼顾脱毒率和成活率，茎尖切取的大小要适中，一般切取长度为0.2~0.50^，带有1〜2个叶原基的茎尖作为培养材料。苹果切取0.1〜

0.211^茎尖培养，脱毒株率为35.0^。其中，苹果褪绿叶斑病毒的脱毒株率为80.0^，苹果茎痘病毒的为65.0^,苹果茎沟病毒的为50.0^。在未脱除的病毒中，苹果褪绿叶斑病毒占19.19^，苹果茎痘病毒占33.3*，苹果茎沟病毒占47.6%。

(二）茎尖培养脱毒机制

应用电子显微镜和荧光抗体技术可以明显地看出，在每一个“植物-病毒”组合中，都存在一*个特殊的顶端免疫区。这个顶端免疫区决定了无毒茎尖的大小^如果仅最顶端一个细胞不带病毒，则无毒签尖大小为0.1〜0.3^^;如果免疫区比较大，则无毒莲尖大小为0.5〜3111^然而，即使在分生组织细胞中有病毒粒子，培育无病毒苗也是可能的。对此已提出多种解释，如：正常的或病毒的核蛋白合成之间的营养竞争、酚胺抑制剂的存在和因切取茎尖时细胞受伤而引起的代谢破坏。虽然这些假设中没有一种令人十分信服的解释，然而，这些假设却很好地说明了较小的茎尖对于脱毒是最重要的。

(三）应用

茎尖培养获得的小幼株，可离体培养得到分生单系。要尽可能快地对每一个分生单系的2株或3株小幼株进行鉴定，确定是否还带病毒。在确定分生单系是否不带病毒之前，需多次重复这些实验。在有条件的单位，可用酶联免疫吸附检测法代替指示植物进行这种鉴定。由此而获得的无病毒分生单系，通过腋生分枝快速繁殖，可在短期内给生产单位提供无病毒试管苗。

通常情况下，无病毒苗是保存在黑暗、低温的条件下，在此条件下，无病毒苗可在试管中保存很长时间。如木本果树的试验结果是，切除在繁殖培养基上伸长生长茎的所有叶片，再把茎浸渍在基本培养基中，然后把试管放在冰箱中，结果5年后，这些枝条在新鲜培养基上仍能增殖。

, TER-SPACING: 0pt; COLOR: rgb(0,0,0); FONT-SIZE: 10.5pt; mso-spacerun: 'yes'" class=20>〜5。1，扦插在珍珠岩等适宜的保湿扦插床中，不久即发根，一个月后即可移植。如果用此法不能获得无病毒个体时，就必须剪取新梢顶端更短的部分。

二、茎尖培养脱毒

(―)概述

均需要特殊的培养基。在果树苗木茎尖培养中最常使用的是河-

(二）茎尖培养脱毒机制

(三）应用

关键词： 病毒

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